摘要:本實驗的目的是利用Cre/lox重組系統進行"友好"基因座的篩選,即利用一個兩端帶有lox位點的標記基因去轉染動物細胞或生產轉基因動物,獲得可以高效表達外源基因的"友好"基因座.一旦篩選到好的基因座,就建成了一個可以在動物體穩定地高效表達外源基因的技術平臺.為此,利用野生型loxP位點和含有一個點突變的lox511位點分別構建兩個載體pSL-loxGFP和pSL-loxIFN.首先將含有GFP和新霉素基因的質粒pSL-loxGFP DNA轉染牛胎兒成纖維細胞,并用G418篩選,挑選出發綠色熒光的細胞克隆.經增殖培養之后,再將含有雞γ-干擾素基因的質粒pSL-loxIFN和含有Cre重組酶基因的質粒pBS185 DNA共轉染發熒光的細胞克隆,篩選出發生重組后不再發光的細胞克隆.用PCR法檢測了兩個不發熒光的細胞克隆及發熒光的細胞克隆,并使用質粒pSL-loxIFN、質粒pSL-loxGFP及牛基因組作為對照.檢測結果顯示,在Cre重組酶的作用下,兩個不發熒光的細胞克隆中,一個發生了基因置換,另一個發生了基因刪除.以上實驗表明,巧妙地用Cre/lox重組系統,可以構建一套使外源基因在動物體內定點地高效表達的技術體系.